一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。
3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用。
4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。 药品:提取液:含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。 这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少!
氯醋酸-丙酮沉淀法：将植物样品在液氮中研磨，加入提取液并在低温条件下过夜，然后离心去除上清液。
磷酸盐缓冲液提取法：将植物样品研磨后加入磷酸盐缓冲液，经过离心去除残渣，得到上清液。
三氯醋酸提取法：将植物样品加入三氯醋酸溶液中，经过离心去除上清液，然后用乙醇沉淀蛋白质。
酚酸提取法：将植物样品加入酚酸溶液中，经过离心去除上清液，然后用乙醇沉淀蛋白质。
这些方法各有优缺点，适用于不同类型的植物和实验需求。在选择提取方法时，需要根据具体情况进行选择，并根据实验目的进行优化和调整。博鱼网站 BOYU博鱼网站 BOYU
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